Một hệ thống dễ sử dụng để phân lập và phát hiện sốt rét từ mẫu nước tiểu của bệnh nhân có sử dụng end‐point PCR: [1] phân lập nhanh thành phần DNA từ mẫu nước tiểu; [2] có thể dễ dàng sử dụng hệ thống 2X PCR Master Mix; [3] phương pháp có độ nhạy và độ đặc hiệu cao; [3] bao gồm kiểm chứng phân lập và PCR; [4] Đặt mồi và chứng sẵn có đầy đủ. Các phương pháp này rất lý tưởng cho sử dụng để giám sát các tác nhân gây bệnh kháng thuốc; nghiên cứu dịch tễ học; giám sát và điều tra thực địa các tác nhân gây bệnh.
Giới thiệu bộ xét nghiệm 2X PCR Master Mix
 |
Sốt rét là một bệnh do muỗi truyền và được xem là một trong những nguyên nhân đứng đầu gây tử vong trên toàn thế giới. Sốt rét là một bệnh nhiệt đới có thể gây tử vong do các ký sinh trùng sốt rét Plasmodium spp. Ước tính có 300‐500 triệu ca nhiễm mới sốt rét mỗi năm, với 1.5‐2.7 triệu ca tử vong trên toàn cầu. Hầu hết các ca tử vong đó xảy ra ở khu vực sub‐Saharan, châu Phi. Trong khi máu thường là mẫu bệnh phẩm dùng để chẩn đoán bệnh sốt rét, thì cả nước bọt và nước tiểu lại cũng có thể là mẫu bệnh phẩm thay thế và lại là phương pháp chẩn đoán ít xâm lấn hơn.
Bộ xét nghiệm phát hiện sốt rét dựa vào PCR trên mẫu bệnh phẩm nước tiểu (Norgen’s Urine‐Based Malaria PCR Detection Kit) là một hệ thống có sẵn để sử dụng phân lập hoặc phát hiện sốt rét từ mẫu nước tiểu. Trước tiên kít chẩn đoán gồm các thành phần để phân lập nhanh tổng số DNA, gồm cả DNA của vi khuẩn từ mẫu nước tiểu, sử dụng biểu đồ sắc ký dựa trên dải đồ Norgen’s proprietary resinhay phân lập acide nucleic(nucleic acid isolation).
Thứ hai, kít chẩn đoán chứa hệ Malaria PCR Master Mix và chứng cho khuếch đại PCR. Các sản phẩm PCR khuếch đại sau đó được phát hiện trên kết quả điện di thạch agarose. Như một sự lựa chọn, việc phát hiện có thể thực hiện bằng real‐time PCR sử dụng đường cong tan chảy (melt curves). Chúng ta có thể xem bản bên phải.
Các bộ Malaria Master Mix chứa các thuốc thử và các enzymes để khuếch đại đặc hiệu một vùng 350bp của Malaria DNA. Ngoài ra, Norgen’s Urine‐Based Malaria PCR Detection Kit còn chứa một hệ thống khuếch đại các dòng khác (heterologous) thứ hai để có thể xác định sự ức chế PCR và/ hoặc phân lập không đầy đủ. Bộ thử được thiết kế để cho cho phép kiểm tra 24 mẫu. Các bộ mồi Malaria PCR Primer Set và chứng (Controls) cũng có sẵn để dùng trong phát hiện end‐point RT‐PCR.
Các đặc tính và lợi điểm của xét nghiệm
·Không xâm lấn, nguồn mẫu không nhiễm trùng ‐ nước tiểu không nhiễm hầu hết các tác nhân gây bênh nào khác;
·Phân lập chất lượng cao, Inhibitor‐Free DNA ‐ loại bỏ các muối cô đặc cao, các chất thải của quá trình chuyển hóa và các protein ccung cấp chất lượng cao, DNA cao;
·Quy trình thực hiện nhanh ‐Quá trình phân lập và phát hiện sốt rét chưa đến 3 giờ;
·Tính chính xác trong phiên giải kết quả ‐ Các dải band khuếch đại có thể phân biệt một cách rõ ràng và các đường cong tan chảy không chống lên nhau;
·Độ nhạy và độ đặc hiệu cao ‐ Giới hạn phát hiện < 860 copies/mL nước tiểu;
·Mua các mồi và chứng có thể riêng rẻ ‐ các bộ mồi sốt rét cũng như chứng dương và chứng âm có thể cung ứng nhanh chóng.
